成果转化行动

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江西省科学院可转化专利（二）

来源：原创更新时间：2024-08-16 浏览：3051

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一种嗜酸乳杆菌高密度液体培养方法

专利号：ZL201610407425.3

发明人：袁林,郭建军,曾静,郭浩,王林庚

专利摘要：本发明公开了一种嗜酸乳杆菌高密度液体培养方法，包括以下步骤：将嗜酸乳杆菌经过三角瓶培养基以及种子罐培养基扩繁后进入发酵罐，发酵18h，培养温度为35℃，搅拌转速200rpm，pH采用2mol/L的NaOH通过种子罐补碱泵自动控制在7.3，并且通入氮气与氢气的混合气体(氮气体积/氢气体积＝10：1)维持发酵罐压力0.05MPa，期间每隔30min取样一次并检查葡萄糖残余浓度，通过发酵罐上的补料泵补充葡萄糖维持发酵罐内葡萄糖浓度2g/L。本发明方法通过控制葡萄糖浓度来协调菌体生长，并且合适的pH值与还原性气体氢气的浓度，有效的提高了嗜酸乳杆菌的培养浓度。

一种优化角蛋白酶Ker高效分泌表达的信号肽及其应用

专利号：ZL201710341230.8

发明人：曾静,袁林,郭建军,郭浩,王林庚

专利摘要：本发明公开了一种优化角蛋白酶高效分泌表达的信号肽及其应用，属于基因工程和酶工程领域。本发明通过对来源于枯草芽孢杆菌的46种分泌信号肽进行初步筛选，然后对其中6种明显提高角蛋白酶分泌量的分泌信号肽进行定向改造，从而获得一种优化角蛋白酶高效分泌表达的信号肽。此信号肽的N端具有信号肽AbnA的前九个氨基酸残基，H段具有信号肽YfkN的疏水序列，C端具有信号肽PhoB的后四个氨基酸残基。本发明通过在角蛋白酶Ker的N端融合此信号肽，使重组枯草芽孢杆菌的角蛋白酶分泌效率显著提高，其胞外角蛋白酶酶活提高了3.39倍。改造后的菌株的胞外产角蛋白酶能力显著提高，更利于工业化应用，可降低生产成本，提高生产效率。

粪肠球菌高密度发酵培养基及其发酵工艺

专利号：ZL201710401514.1

发明人：袁林,郭建军,曾静,杨罡,郭浩,王林庚

专利摘要：本发明涉及一种粪肠球菌的高密度发酵培养基及其发酵工艺，发酵培养基组分及其含量如下：甘油20～30g/L、豆粕10～15g/L、硫酸铵1～3g/L、三水合磷酸氢二钾2～3g/L、三水合乙酸钠3～8g/L、二水合柠檬酸钠2～4g/L、七水合硫酸镁0.3～0.8g/L、一水合硫酸锰0.1～0.3g/L。发酵工艺:采用高溶氧(25％)并结合甘油为碳源发酵,以碳酸钠恒定发酵液pH值5.5，并在发酵过程中流加补料控制甘油浓度在10g/L,培养16小时后OD(600nm)大于35标志发酵结束，发酵液含粪肠球菌活菌数可达8×1010CFU/mL以上。本发明采用高溶氧结合甘油为碳源的发酵方式降低了发酵液中的乳酸浓度，发酵液含粪肠球菌可以达到8×1010CFU/mL以上，减小生物量的分离费用，缩短生产周期，降低生产成本、提高生产效率。

一种乳酸菌与双歧杆菌的冻干保护剂及乳酸菌与双歧杆菌冻干粉的制备工艺

专利号：ZL201810641334.5

发明人：袁林,郭建军,曾静

专利摘要：本发明提供一种乳酸菌与双歧杆菌的冻干保护剂，提高乳酸菌与双歧杆菌冻干过程的成活率，还提供一种乳酸菌与双歧杆菌冻干粉的制备工艺，提高乳酸菌和双歧杆菌冻干后产品在常温下的稳定性。本发明制备的乳酸菌和双歧杆菌冻干产品在冻干过程中的存活率明显高于普通制备工艺，尤其在常温下具有极高的活性稳定性，所以该项技术的应用可以避免乳酸菌或双歧杆菌等微生态产品冷链运输、低温存储，减少能耗；同时冻干过程的存活率高，可以提升企业的生产效率和降低生产成本。

一种热稳定性提高的植酸酶突变体及其制备方法和应用

专利号：ZL202310242536.3

发明人：曾静,何础阔,袁林,郭建军,王通,聂俊辉

专利摘要：本发明公开了一种热稳定性提高的植酸酶突变体及其制备方法和应用，属于基因工程和酶工程领域。所述植酸酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。编码所述植酸酶突变体的基因序列如SEQ ID NO.2所示。本发明采用USERecDNA重组技术将植酸酶YiAPPA中结构片段Val23～Thr67替换为植酸酶rPhyXT52中结构片段Val21～Thr65、以及将植酸酶YiAPPA中结构片段Leu381～Ile424替换为植酸酶rPhyXT52中结构片段Leu379～Asp423，获得了热稳定性显著提高并且植酸酶活性基本不变的植酸酶突变体Yr‑Mut，在动物饲料添加剂领域具有良好的应用前景。

一种热稳定性和蛋白酶抗性提高的植酸酶突变体及其制备方法和应用

专利号：ZL202111458828.8

发明人：郭建军,曾静,袁林,黄国昌,熊大维,王振希,聂俊辉

专利摘要：本发明公开了一种热稳定性和蛋白酶抗性提高的植酸酶突变体及其制备方法和应用，属于基因工程和酶工程领域。本发明将植酸酶YiAPPA中第108位丙氨酸和第322位丝氨酸均突变为半胱氨酸，向植酸酶YiAPPA中引入二硫键C108‑C322，获得突变体YiAPPA‑A108C/S322C。本发明提供的植酸酶突变体YiAPPA‑A108C/S322C于85℃的半衰期由对照(突变前)的6min提高至15min，提高了1.5倍，并且YiAPPA‑A108C/S322C的胃蛋白酶抗性和胰蛋白酶抗性分别提高了16％和12％。植酸酶突变体YiAPPA‑A108C/S322C的热稳定性和蛋白酶抗性明显改良，在动物饲料添加剂领域具有良好的应用前景。

一种不依赖于抗生素并稳定高产α-淀粉酶的短小芽孢杆菌及其构建方法和应用

专利号：ZL202310337281.9

发明人：曾静,袁林,郭建军,何础阔

专利摘要：本发明公开了一种不依赖于抗生素并稳定高产α‑淀粉酶的短小芽孢杆菌及其构建方法和应用，属于基因工程和发酵工程领域。所述短小芽孢杆菌(Brevibacillus choshinensis)的保藏编号为CCTCC NO：M 2023265。本发明通过敲除短小芽孢杆菌基因组中的必需基因ftsz，同时在表达重组α‑淀粉酶的质粒中插入ftsz，获得重组的短小芽孢杆菌菌株。本发明的短小芽孢杆菌菌株发酵过程中不依赖于额外的抗生素，具有极高遗传稳定性，且发酵产酶水平由改造前的6241.3U/mL提高至23603.2U/mL，提高了3.8倍。因此，本发明有助于酶制剂的高效低成本生产，具有很好的工业应用前景。

一种乳酸菌发酵稳定剂及其制备方法和应用方法

专利号：ZL202211140427.2

发明人：郭建军,袁林,曾静,聂俊辉,黄国昌,熊大维,王通,岳斯源

专利摘要：本发明公开了一种乳酸菌发酵稳定剂及其制备方法和应用方法，所述乳酸菌发酵稳定剂包括糖类，D‑氨基酸及磷酸氢钙和抗坏血酸钠，所述乳酸菌发酵稳定剂为乳酸菌的发酵培养提供营养成分能被有效利用，提高了在乳酸菌培养后发酵液中活菌数；采用所述乳酸菌发酵稳定剂进行培养后的乳酸菌菌体在形态上变得又短又卵圆，使菌体表面积减小；改性了乳酸菌菌体细胞壁形状和强度，维持了其细胞膜和细胞壁的完整性；减少在冷冻过程中形成的冰晶对菌体的损伤，提高了乳酸菌的冷冻干燥的抗逆性，提高了乳酸菌在常温下的存活率；本发明提供的乳酸菌发酵稳定剂，配方组成简单、成本低廉，应用操作简便，能使乳酸菌的性质更稳定、生物活性更强、常温贮藏更久。

一种负压条件下高密度发酵生产丁酸梭菌的工艺及应用

专利号：ZL202110231477.0

发明人：郭建军,袁林,曾静,聂俊辉,王通

专利摘要：本发明涉一种负压条件下的高密度发酵生产丁酸梭菌的工艺，其包括将丁酸梭菌种子液接种至发酵培养基中，温度35～40℃，搅拌转速100～300r/min，用可溶性碱恒定pH至6.0～7.5，于负压抽气保持真空度为0.03～0.08Mpa下进行厌氧发酵，培养10h后发酵结束。采用负压抽气维持真空与开启搅拌，营造了严格厌氧环境，以及基于丁酸梭菌菌体与芽孢的氨基酸特性优化了发酵培养基与补料分批发酵工艺，最大限度的降低了代谢有害物的累积，促进了丁酸梭菌的增殖与芽孢转化，得到丁酸梭菌发酵液中芽孢数达到了79亿CFU/mL以上。该工艺发酵生产丁酸梭菌具有不需通惰性气体、发酵周期短、后处理简单、总体上极大的降低了生产成本等优点，大幅度提高丁酸梭菌清液发酵的芽孢数，同时可生产出高性价比的丁酸梭菌。

一种淀粉降解能力提高的嗜热酸性III型普鲁兰水解酶突变体及其制备方法和应用

专利号：ZL202210355246.5

发明人：曾静,何础阔,袁林,郭建军,侯安伟,聂俊辉

专利摘要：本发明公开了一种淀粉降解能力提高的嗜热酸性III型普鲁兰水解酶突变体及其制备方法和应用，属于基因工程和酶工程领域。对嗜热酸性III型普鲁兰水解酶TK‑PUL中进化偶联氨基酸残基对K526/L538进行饱和突变，构建相应的饱和突变体文库，通过比较各突变体对可溶性淀粉的酶活力，筛选出针对可溶性淀粉的比酶活力显著提高的III型普鲁兰水解酶突变体Mut(K526N/L538E)。本发明提供的III型普鲁兰水解酶突变体Mut对可溶性淀粉的酶活力由对照(突变前)的54.08U/mg提高到190.47U/mg，提高了2.52倍，更适用于淀粉酶法制糖工业，有利于简化工艺、节约能源。

一种制备玉米抗性淀粉的III型普鲁兰水解酶突变体及其制备方法和应用

专利号：ZL202310056259.7